Patologiczny białkomocz jest jednym z najważniejszych i trwałych objawów chorób nerek i dróg moczowych. Określenie stężenia białka w moczu jest istotnym i ważnym elementem badania moczu. Identyfikacja i ilościowa ocena białkomoczu jest ważna nie tylko w diagnostyce wielu pierwotnych i wtórnych chorób nerek, ocena zmian w nasileniu białkomoczu w dynamice niesie informację o przebiegu procesu patologicznego, o skuteczności leczenia. Wykrywanie białka w moczu, nawet w śladowych ilościach, powinno być alarmujące dla możliwej choroby nerek lub dróg moczowych i wymaga ponownej analizy. Na szczególną uwagę zasługuje bezsens badań moczu, aw szczególności oznaczanie białka w moczu bez przestrzegania wszystkich zasad jego zbierania.

Wszystkie metody oznaczania białka w moczu można podzielić na:

• Jakość,
• Półilościowy
• Ilościowy.

Metody jakościowe

Wszystkie wysokiej jakości próbki białka moczu opierają się na zdolności białek do denaturacji pod wpływem różnych czynników fizycznych i chemicznych. W obecności białka w próbce moczu występuje zmętnienie lub utrata kłaczkowatego osadu.

Warunki określania białka w moczu na podstawie reakcji krzepnięcia:

1. Mocz powinien być kwaśny. Alkaliczny mocz zakwasza się kilkoma (2-3) kroplami kwasu octowego (5–10%).
2. Mocz powinien być czysty. Zmętnienie jest eliminowane przez filtr papierowy. Jeśli zmętnienie nie zniknie, dodaj talk lub spaloną magnezję (około 1 łyżeczka na 100 ml moczu), wstrząśnij i przefiltruj.
3. Test jakościowy należy przeprowadzić w dwóch probówkach, z których jedna - kontrola.
4. Poszukiwanie zmętnienia powinno być na czarnym tle w świetle przechodzącym.

Do jakościowych metod oznaczania białka w moczu należą:

Jak wykazały liczne badania, żadna z wielu znanych metod jakościowego oznaczania białka w moczu nie pozwala na uzyskanie wiarygodnych i powtarzalnych wyników. Pomimo tego, w większości CDL w Rosji metody te są szeroko stosowane jako badania przesiewowe - w moczu z pozytywną odpowiedzią jakościową przeprowadza się dalsze oznaczanie ilościowe białka. Spośród reakcji jakościowych częściej stosuje się test Gellera i próbkę z kwasem sulfosalicylowym, jednak próbka z kwasem sulfosalicylowym jest najczęściej uważana za najbardziej odpowiednią do wykrywania patologicznego białkomoczu. Test wrzenia nie jest obecnie praktycznie stosowany ze względu na jego pracochłonność i czas trwania.

Metody półilościowe

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov opiera się na teście pierścieniowym Gellera, więc te same błędy obserwuje się w tej metodzie, jak w teście Gellera.

Obecnie paski diagnostyczne są coraz częściej stosowane do oznaczania białka w moczu. Do półilościowego oznaczania białka w moczu na pasku najczęściej stosowanym barwnikiem jest błękit bromofenolowy w buforze cytrynianowym. Zawartość białka w moczu ocenia się na podstawie intensywności niebiesko-zielonego koloru, który rozwija się po kontakcie strefy reakcji z moczem. Wynik ocenia się wizualnie lub za pomocą analizatorów moczu. Pomimo dużej popularności i oczywistych zalet metod chemii na sucho (prostota, szybkość analizy), te metody analizy moczu w ogóle, a w szczególności oznaczanie białka, nie są pozbawione poważnych wad. Jedną z nich, prowadzącą do zniekształcenia informacji diagnostycznych, jest większa wrażliwość wskaźnika niebieskiego bromofenolu na albuminę w porównaniu z innymi białkami. Pod tym względem paski testowe są głównie przystosowane do wykrywania selektywnego białkomoczu kłębuszkowego, gdy prawie całe białko moczu jest reprezentowane przez albuminę. Wraz z postępem zmian i przejściem selektywnego białkomoczu kłębuszkowego do nieselektywnego (pojawienie się globulin w moczu), wyniki oznaczania białka są niedoszacowane w porównaniu z wartościami rzeczywistymi. Fakt ten uniemożliwia wykorzystanie tej metody do oznaczania białka w moczu w celu oceny stanu nerek (filtra kłębuszkowego) w czasie. W białkomoczu kanalikowym wyniki oznaczania białka są również niedoszacowane. Oznaczanie białka za pomocą pasków diagnostycznych nie jest wiarygodnym wskaźnikiem niskiego poziomu białkomoczu (większość dostępnych obecnie pasków diagnostycznych nie ma zdolności do wychwytywania białka w moczu w stężeniu niższym niż 0,15 g / l). Negatywne wyniki oznaczania białka na paskach nie wykluczają obecności w moczu globulin, hemoglobiny, uromukoidu, białka Bens-Jonesa i innych paraprotein.

Płatki śluzu o wysokiej zawartości glikoprotein (na przykład w procesach zapalnych w drogach moczowych, ropie, bakteriurii) mogą osiadać w strefie wskaźnikowej paska i prowadzić do fałszywie dodatnich wyników. Wyniki fałszywie dodatnie mogą być również związane z wysokim stężeniem mocznika. Słabe oświetlenie i słaba percepcja kolorów mogą powodować niedokładne wyniki.

W związku z tym stosowanie pasków diagnostycznych powinno być ograniczone do procedur przesiewowych, a wyniki uzyskane przy ich pomocy powinny być traktowane jedynie jako orientacyjne.

Metody ilościowe

Prawidłowe ilościowe oznaczanie białka w moczu w niektórych przypadkach nie jest łatwym zadaniem. Trudności związane z jego rozwiązaniem zależą od następujących czynników:

• niska zawartość białka w moczu zdrowej osoby, często na granicy czułości większości znanych metod;
• obecność w moczu wielu związków, które mogą zakłócać przebieg reakcji chemicznych;
• znaczne wahania zawartości i składu białek moczu w różnych chorobach, które utrudniają wybór odpowiedniego materiału kalibracyjnego.

W laboratoriach klinicznych stosuje się tak zwane „rutynowe” metody oznaczania białka w moczu, ale nie zawsze zapewniają one zadowalające wyniki.

Z punktu widzenia specjalisty analityka pracującego w laboratorium metoda przeznaczona do ilościowego oznaczania białka w moczu musi spełniać następujące wymagania:

• mają liniową zależność między absorpcją kompleksu utworzonego podczas reakcji chemicznej a zawartością białka w próbce w szerokim zakresie stężeń, unikając w ten sposób dodatkowych operacji przy przygotowywaniu próbki do badania;
• powinien być prosty, nie wymagać wysoko wykwalifikowanego wykonawcy, być wykonywany przy małej liczbie operacji;
• mają wysoką czułość, niezawodność analityczną przy użyciu małych ilości badanego materiału;
• być odporne na różne czynniki (różnice w składzie próbki, obecność leków itp.);
• mieć akceptowalny koszt;
• łatwo dostosować się do automatycznych analizatorów;
• wynik oznaczenia nie powinien zależeć od składu białka próbki moczu.

Żadna z obecnie znanych metod ilościowego oznaczania białka w moczu nie może być w pełni „złotym standardem”.

Ilościowe metody oznaczania białka w moczu można podzielić na turbidymetryczne i kolorymetryczne.

Metody turbidymetryczne

Metody turbidymetryczne obejmują:

• oznaczanie białka kwasem sulfosalicylowym (SSC),
• oznaczanie białka za pomocą kwasu trichlorooctowego (THC),
• oznaczanie białka za pomocą chlorku benzetoniowego.

Metody turbidymetryczne polegają na zmniejszaniu rozpuszczalności białek moczu z powodu tworzenia zawiesiny zawieszonych cząstek pod wpływem środków strącających. Zawartość białka w próbce testowej ocenia się albo na podstawie intensywności rozpraszania światła, określonej przez liczbę cząstek rozpraszających światło (nefelometryczna metoda analizy), albo przez osłabienie strumienia świetlnego przez otrzymaną zawiesinę (turbidymetryczna metoda analizy).

Wielkość rozpraszania światła w metodach precypitacji w wykrywaniu białka w moczu zależy od wielu czynników: szybkości mieszania odczynników, temperatury mieszaniny reakcyjnej, pH podłoża, obecności obcych związków, metod fotometrii. Staranne przestrzeganie warunków reakcji przyczynia się do tworzenia stabilnej zawiesiny o stałej wielkości cząstek i uzyskiwania stosunkowo powtarzalnych wyników.

Niektóre leki wpływają na wyniki metod turbidymetrycznych oznaczania białka w moczu, co prowadzi do tak zwanych wyników „fałszywie dodatnich” lub „fałszywie ujemnych”. Należą do nich niektóre antybiotyki (penicylina benzylowa, kloksacylina itp.), Substancje zawierające jod, nieprzepuszczające promieniowania, leki sulfonamidy.

Metody turbidymetryczne są słabo znormalizowane, często prowadzą do błędnych wyników, ale mimo to są obecnie szeroko stosowane w laboratoriach ze względu na niski koszt i dostępność odczynników. Najpowszechniej stosowaną metodą w Rosji jest oznaczanie białka za pomocą kwasu sulfosalicylowego.

Metody kolorymetryczne

Najbardziej czułe i dokładne są metody kolorymetryczne do oznaczania białka całkowitego w moczu w oparciu o specyficzne reakcje białek barwnych.

Obejmują one:

1. reakcja biuretu,
2. Metoda Lowry'ego
3. metody oparte na zdolności różnych barwników do tworzenia kompleksów z białkami:
   • Ponceau S (Ponceau S),
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Pyrogallol red.

Z punktu widzenia wykonawcy, w codziennej pracy laboratorium z dużym przepływem badań, metoda biuret jest niewygodna ze względu na dużą liczbę operacji. Jednocześnie metoda ta charakteryzuje się wysoką wiarygodnością analityczną, umożliwia oznaczanie białka w szerokim zakresie stężeń i wykrywanie albuminy, globulin i paraprotein o porównywalnej czułości, w wyniku czego metoda biuretowa jest uważana za punkt odniesienia i jest zalecana do porównania innych metod analitycznych do wykrywania białka w moczu. Metoda biuretowa oznaczania białka w moczu jest korzystnie przeprowadzana w laboratoriach obsługujących oddziały nefrologiczne i stosowana w przypadkach, gdy wyniki oznaczania przy użyciu innych metod są wątpliwe, jak również w celu określenia ilości dziennej utraty białka u pacjentów nefrologicznych.

Metoda Lowry'ego, która ma wyższą czułość niż metoda biuret, łączy reakcję biuretu i reakcję Foliny na aminokwasy tyrozynę i tryptofan w cząsteczce białka. Pomimo wysokiej czułości metoda ta nie zawsze zapewnia wiarygodne wyniki przy określaniu zawartości białka w moczu. Powodem tego jest niespecyficzna interakcja odczynnika Folina z nie-białkowymi składnikami moczu (najczęściej aminokwasy, kwas moczowy, węglowodany). Oddzielenie tych i innych składników moczu przez dializę lub strącanie białka pozwala z powodzeniem wykorzystać tę metodę do ilościowego oznaczania białka w moczu. Niektóre leki - salicylany, chlorpromazyna, tetracykliny mogą wpływać na tę metodę i zniekształcać wyniki badania.

Wystarczająca czułość, dobra odtwarzalność i łatwość oznaczania białka przez barwniki wiążące czynią te metody obiecującymi, ale wysoki koszt odczynników uniemożliwia ich szersze zastosowanie w laboratoriach. Obecnie metoda czerwieni pirogalolowej staje się coraz bardziej powszechna w Rosji.

Przeprowadzając badanie poziomu białkomoczu, należy pamiętać, że różne metody określania białkomoczu mają różną czułość i swoistość względem wielu białek moczu.

Na podstawie danych empirycznych zaleca się określenie białka za pomocą dwóch różnych metod i obliczenie wartości rzeczywistej za pomocą jednego z następujących wzorów:

białkomocz = 0,4799 B + 0,5230 L;
białkomocz = 1,5484 B - 0,4825 S;
białkomocz = 0,2167 S + 0,7579 L;
białkomocz = 1,0748 P - 0,0986 B;
białkomocz = 1,0104 P - 0,0289 S;
białkomocz = 0,8959 P + 0,0845 L;

gdzie:
B - wynik pomiaru z Coomassie G-250;
L oznacza wynik pomiaru odczynnikiem Lowry'ego;
P - wynik pomiaru z molibdenianem pirogalolu;
S jest wynikiem pomiaru kwasu sulfosalicylowego.

Biorąc pod uwagę wyraźne wahania poziomu białkomoczu w różnych porach dnia, jak również zależność stężenia białka w moczu od diurezy, jej różnej zawartości w poszczególnych porcjach moczu, obecnie patologia nerek ocenia często nasilenie białkomoczu przez codzienną utratę białka w moczu, to znaczy w celu określenia tak zwanego codzienne białkomocz. Wyraża się wg / dzień.

Jeśli niemożliwe jest pobranie dziennego moczu, zaleca się określenie stężenia białka i kreatyniny w pojedynczej porcji moczu. Ponieważ szybkość uwalniania kreatyniny w ciągu dnia jest dość stała i nie zależy od zmian szybkości oddawania moczu, stosunek stężenia białka do stężenia kreatyniny jest stały. Ten stosunek dobrze koreluje z codziennym wydalaniem białka i dlatego może być stosowany do oceny nasilenia białkomoczu. Normalny stosunek białko / kreatynina powinien być mniejszy niż 0,2. Białko i kreatynina mierzone są wg / l. Ważną zaletą metody oceny nasilenia białkomoczu w stosunku białko-kreatynina jest całkowita eliminacja błędów związanych z niezdolnością lub niekompletnym pobieraniem moczu dziennie.

Literatura:

• O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu E. Mikhailov, „Kliniczne aspekty wykrywania i oceny białkomoczu”, Podręcznik szefa CPL, nr 1, styczeń 2007
• A. V. Kozlov, „Proteinuria: metody jego wykrywania”, wykład, St. Petersburg, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, „Diagnostyka laboratoryjna choroby nerek. Zespół moczowy ”, - Podręcznik szefa KDL, nr 12, grudzień 2006
• V.I. Pupkova, L.M. Prasolov - Oznaczanie białka w moczu i płynie mózgowo-rdzeniowym. Koltsovo, 2007
• Podręcznik metod badań laboratoryjnych. Ed. E. A. Kost. Moskwa, „Medycyna”, 1975

Powiązane artykuły

Ilościowe metody określania całkowitego białka w moczu

Każda próbka moczu jest odpowiednia do oznaczenia ilościowego białka. Większość badaczy woli określać ilość białka w moczu zbieranego dziennie, aby ustalić dzienną utratę białka.

Sekcja: Analiza moczu

Półilościowe metody oznaczania całkowitego białka w moczu

Obecnie paski diagnostyczne są coraz częściej stosowane do oznaczania białka w moczu. Do półilościowego oznaczania białka w moczu na pasku najczęściej stosowanym barwnikiem jest błękit bromofenolowy w buforze cytrynianowym. Zawartość białka w moczu ocenia się na podstawie intensywności niebiesko-zielonego koloru, który rozwija się po kontakcie strefy reakcji z moczem.

Sekcja: Analiza moczu

Jakościowe metody oznaczania białka całkowitego w moczu

Wszystkie wysokiej jakości próbki białka moczu opierają się na zdolności białek do denaturacji pod wpływem różnych czynników fizycznych i chemicznych. W obecności białka w próbce moczu występuje zmętnienie lub utrata kłaczkowatego osadu.

Sekcja: Analiza moczu

Oznaczanie białka w moczu w próbce z 20% kwasem sulfosalicylowym

Próbka z 20% kwasem sulfosalicylowym odnosi się do reakcji jakościowych do oznaczania białka w moczu. Ponieważ jest on oparty na reakcji krzepnięcia, badany mocz musi spełniać pewne wymagania: być przezroczystym i mieć reakcję kwasową.

Sekcja: Analiza moczu

Test pierścieniowy Gellera

Test pierścieniowy Gellera jest jakościową reakcją oznaczania białka w moczu. Ponieważ jest on oparty na reakcji krzepnięcia, badany mocz musi spełniać pewne wymagania: być przezroczystym i mieć reakcję kwasową.

Sekcja: Analiza moczu

Metody oznaczania białka w moczu

Niewielka ilość białka w dziennym moczu występuje również u całkowicie zdrowych osobników, jednak takie małe stężenia nie są wykrywane w pojedynczych porcjach przy użyciu obecnie stosowanych metod. Około 70% białek moczu zdrowej osoby odpowiada za uromucoid, białko będące produktem tkanki nerkowej; w związku z tym udział białka kłębuszkowego w moczu zdrowych ludzi jest znikomy, a białkomocz zwykle wynosi 50–150 mg / dobę, przy czym większość białek moczu jest identyczna z serwatką.

Przyjmuje się rozróżnienie następujących form białkomoczu w zależności od miejsca pochodzenia: prerenal, związane ze zwiększonym rozpadem białek w tkance, ciężką hemolizą; nerki, ze względu na patologię nerek, które można podzielić na kłębuszkowe i kanalikowe; postrenalina, związana z patologią dróg moczowych i najczęściej spowodowana wysiękiem zapalnym.

W zależności od czasu trwania, emitują one trwały białkomocz, który istnieje przez wiele tygodni, a nawet lat, i przemijający, pojawiający się okresowo, czasami nawet przy braku choroby nerek, na przykład z gorączką i ciężkim zatruciem. Wskazane jest rozróżnienie między zmiennością białkomoczu: z dzienną utratą białka do 1 g - umiarkowaną, od 1 do 3 g - średnią i ponad 3 g - wyraźną.

Wykrywanie w moczu białek o stosunkowo dużej masie cząsteczkowej wskazuje na brak selektywności filtra nerkowego i jego wyraźne uszkodzenie. W takich przypadkach należy mówić o niskiej selektywności białkomoczu. Dlatego obecnie definicja frakcji białka w moczu stała się powszechna. Najbardziej dokładne metody to elektroforeza w żelach skrobiowych i poliakrylamidowych.
Zgodnie z wynikami uzyskanymi tymi metodami można ocenić selektywność białkomoczu.

Większość jakościowych i ilościowych metod oznaczania białka w moczu opiera się na jego krzepnięciu w objętości moczu lub na styku między pożywką (mocz i kwas); jeśli istnieje sposób pomiaru intensywności koagulacji, próbka staje się ilościowa.

Zunifikowany test kwasu sulfosalicylowego:

Wymagany odczynnik:

20% roztwór kwasu sulfosalicylowego.

Przebieg badania:

W 2 probówkach wlać 3 ml przefiltrowanego moczu. W probówce dodać 6-8 kropli odczynnika. Na ciemnym tle porównaj rurkę kontrolną z doświadczonym. Zmętnienie w probówce wskazuje na obecność białka, próbkę uważa się za pozytywną.

Jeśli reakcja moczu jest alkaliczna, przed badaniem zakwasza się 2-3 kroplami 10% wodnego roztworu kwasu octowego.

Brandberg-Roberts-Stolnikov Unified Method:

Metoda opiera się na próbce pierścienia Gellera, która polega na tym, że na granicy kwasu azotowego i moczu, w obecności białka, następuje jego koagulacja i pojawia się biały pierścień.

Wymagany odczynnik:

30% roztwór kwasu azotowego (gęstość względna 1,2) lub odczynnik Larionic.
Przygotowanie odczynnika Larion: 20-30 g chlorku sodu rozpuszcza się przez ogrzewanie w 100 ml wody destylowanej, pozostawia do ostygnięcia, przesącza. Do 99 ml przesączu wlewa się 1 ml stężonego kwasu azotowego.

Przebieg badania:

1-2 ml kwasu azotowego (lub odczynnika kwasu laurynowego) wlewa się do probówki i ostrożnie, ponad ścianą probówki, nakłada się taką samą ilość przefiltrowanego moczu. Pojawienie się cienkiego białego pierścienia na granicy dwóch cieczy między 2 a 3 minutą wskazuje na obecność białka w stężeniu około 0,033 g / l. Jeśli pierścień pojawi się wcześniej niż 2 minuty po nałożeniu warstw, mocz należy rozcieńczyć wodą i ponownie rozprowadzić już rozcieńczony mocz. Stopień rozcieńczenia moczu dobiera się w zależności od rodzaju pierścienia, tj. jego szerokość, zwartość i czas pojawienia się. Z nitkowatym pierścieniem, który pojawił się wcześniej 2 minuty, mocz rozcieńcza się 2 razy, szerokim - 4 razy, zwartym - 8 razy itd. Stężenie białka oblicza się mnożąc 0,033 przez współczynnik rozcieńczenia i wyraża się w gramach na 1 l (g / l).

Czasami uzyskuje się biały pierścień, gdy obecne są duże ilości moczanów. W przeciwieństwie do pierścienia białkowego, moczan jest nieco wyższy niż granica między dwoma płynami i rozpuszcza się, gdy jest lekko podgrzany.

Ilościowe oznaczanie białka w moczu przez zmętnienie, utworzone przez dodanie kwasu sulfosalicylowego:

Zasada metody:

Intensywność zmętnienia podczas koagulacji białka kwasem sulfosalicylowym jest proporcjonalna do jego stężenia.

Wymagane odczynniki:

1. 3% roztwór kwasu sulfosalicylowego.

2. 0,9% roztwór chlorku sodu.

3. Standardowy roztwór albuminy - 1% roztwór (1 ml roztworu zawierającego 10 mg albuminy): 1 g liofilizowanej albuminy (z ludzkiej lub bydlęcej surowicy) rozpuszcza się w małej ilości 0,9% roztworu chlorku sodu w kolbie o pojemności 100 ml, a następnie dostosowany do znaku tym samym roztworem. Odczynnik stabilizuje się przez dodanie 1 ml 5% roztworu azydku sodu (NaN3). Odczynnik przechowywany w lodówce jest ważny przez 2 miesiące.

Specjalny sprzęt - kolorymetr fotoelektryczny.

Przebieg badania:

1,25 ml przefiltrowanego moczu wlewa się do probówki, uzupełnia do 5 ml 3% roztworem kwasu sulfosalicylowego i miesza. Po 5 minutach mierzy się je kolorymetrem fotoelektrycznym przy długości fali 590–650 nm (filtr pomarańczowy lub czerwony) w stosunku do kontroli w komórce o długości drogi optycznej 5 mm. Kontrolą jest probówka, w której do 1,25 ml przefiltrowanego moczu dodano do 5 ml 0,9% roztworu chlorku sodu. Obliczenia przeprowadzane są zgodnie z harmonogramem kalibracji, dla konstrukcji których rozcieńczenia są przygotowywane ze standardowego roztworu, jak wskazano w tabeli.

Z każdego otrzymanego roztworu pobiera się 1,25 ml i traktuje jako próbki doświadczalne.

Zależność prostoliniowa przy budowaniu wykresu kalibracyjnego jest przechowywana do 1 g / l. Przy wyższych stężeniach próbkę należy rozcieńczyć i wziąć pod uwagę rozcieńczenie w obliczeniach.

Fałszywie pozytywne wyniki można uzyskać, jeśli w moczu znajdują się środki kontrastowe zawierające jod organiczny. Dlatego test nie może być stosowany u osób przyjmujących preparaty jodu; fałszywie dodatni wynik może również wynikać z preparatów sulfanilamidu, dużych dawek penicyliny i wysokich stężeń w moczu kwasu moczowego.

Metoda Biuret:

Zasada metody:

Wiązania peptydowe białka z solami miedzi w alkalicznym C tworzą kompleks koloru purpurowego. Białka są wstępnie wytrącane kwasem trichlorooctowym.

Wymagane odczynniki:

1. 10% roztwór kwasu trichlorooctowego.
2. 20% roztwór miedzi (CuSO4 ∙ 5H2O).
3. 3% roztwór NaOH.

Przebieg badania:

Do 5 ml moczu pobranego z dziennej ilości dodać 3 ml roztworu kwasu trichlorooctowego, odwirowanego do stałej objętości osadu. Supernatant odsysa się pipetą, osad rozpuszcza się następnie w 5 ml roztworu NaOH. Do roztworu dodaje się 0,25 ml CuSO4, mieszaninę miesza się i odwirowuje. Supernatant jest fotometalizowany przy długości fali 540 nm w kuwecie o długości drogi optycznej 10 mm względem wody destylowanej. Stężenie białka oblicza się z krzywej kalibracyjnej, podczas jego kreślenia stężenie białka (g / l) wykreśla się na osi y, a gęstość optyczną w jednostkach ekstynkcji na osi odciętych. Na podstawie uzyskanego stężenia oblicza się dzienną utratę białka w moczu.

Używanie papieru wskaźnikowego (paski):

Białko można wykryć za pomocą papieru wskaźnikowego (pasków) produkowanego przez „Albuphan”, „Ames” (Anglia), „Albustix”, „Boehringer” (Niemcy), „Comburtest” itp.

Zasada opiera się na zjawisku tzw. Błędu białkowego niektórych wskaźników kwasowo-zasadowych. Część wskaźnikowa papieru jest nasycona błękitem tetrabromofenolowym i buforem cytrynianowym. Gdy papier jest zwilżony, bufor rozpuszcza się i zapewnia odpowiednie pH dla reakcji wskaźnika.

Przy stężeniu aminowym 3,0-3,5 grupy białek reagują ze wskaźnikiem i zmieniają jego pierwotne żółte zabarwienie na zielonkawo niebieskie, po czym, w porównaniu ze skalą kolorów, możliwe jest przybliżone oszacowanie stężenia białka w moczu. Podstawowym warunkiem prawidłowego działania pasków wskaźnikowych jest zapewnienie pH w zakresie 3,0-3,5 dla wystąpienia reakcji.

Jeśli papier jest w kontakcie z badanym moczem dłużej niż ekspozycja określona w instrukcji, bufor cytrynianowy rozpuszcza się w nim, a następnie wskaźnik reaguje na prawdziwe pH moczu, tj. daje fałszywą pozytywną reakcję. Ze względu na to, że pojemność bufora jest ograniczona, nawet jeśli wytyczne są przestrzegane w próbkach zbyt zasadowego moczu (pH> 6,5), uzyskuje się wyniki fałszywie dodatnie, aw próbkach zbyt kwaśnego moczu (pH 6,5) moczu, o niskiej gęstości względnej mocz i przy niskim stężeniu bensa jones białka.

Wymagane odczynniki:

2 M bufor octanowy pH 4,9.

Przebieg badania:

Przefiltrowany mocz w ilości 4 ml miesza się z 1 ml buforu i ogrzewa przez 15 minut w łaźni wodnej w temperaturze 56 ° C. W obecności białek Bens-Jonesa w ciągu 2 minut pojawia się wyraźny osad, a jeśli stężenie białka Bens-Jonesa jest mniejsze niż 3 g / l, próbka może być ujemna. W praktyce jest to niezwykle rzadkie, ponieważ w większości stężenie białka Bens-Jones w moczu jest znaczne.

Z całkowitą pewnością białko Bensa-Jonesa można wykryć za pomocą badania immunoelektroforetycznego z użyciem swoistych surowic przeciwko ciężkim i lekkim łańcuchom immunoglobulin.

Oznaczanie albumozy (proteozy):

Albumozy są produktami rozkładu białek, których zasada opiera się na fakcie, że nie zaginają się po zagotowaniu, ale dają pozytywną reakcję biuretową i są solone z pewnymi solami, zwłaszcza siarczanem amonu i octanem cynku w środowisku kwaśnym.

Normalny mocz nie zawiera albumozy. Ślady mogą znajdować się w normalnym moczu w przypadku zanieczyszczenia nasieniem. W patologii albumoza może występować w moczu podczas stanów gorączkowych, transfuzji krwi i osocza, resorpcji wysięków i przesięków oraz rozpadu guzów.

Wymagane odczynniki:

1. Nasycony roztwór chlorku sodu.
2. Stężony roztwór sody kaustycznej.
3. Słaby roztwór siarczanu miedzi (prawie bezbarwny).

Przebieg badania:

Nasycony roztwór chlorku sodu (1/3 objętości) dodaje się do moczu zakwaszonego kwasem octowym, gotuje i gorący płyn filtruje. Albumozy przechodzą do filtratu, w którym ich obecność jest określona przez reakcję biuretową. Do przesączu dodać 1/2 objętości stężonego roztworu sody kaustycznej i kilka kropel słabego roztworu siarczanu miedzi. W przypadku próbki dodatniej uzyskuje się czerwono-fioletowy kolor.

Przy pozytywnym teście z kwasem sulfosalicylowym mocz jest podgrzewany. Jeśli zmętnienie zniknie i pojawi się ponownie po ochłodzeniu, oznacza to, że mocz zawiera albumozy lub białko Bens-Jonesa.

Białko w moczu, badania laboratoryjne

Metody oznaczania białka w moczu

Dla kliniki liczy się zarówno jakościowe, jak i ilościowe oznaczanie białka w moczu.

Testy jakościowe do oznaczania białka w moczu
Zaproponowano ponad 100 reakcji do jakościowego oznaczania białka w moczu. Większość z nich opiera się na wytrącaniu białka za pomocą środków fizycznych (ogrzewanie) lub chemicznych. Obecność białka potwierdza pojawienie się zmętnienia.

Interesujące są również suche próbki kolorymetryczne.

Poniżej zostaną opisane tylko najważniejsze dla praktyki próbki.

Oznaczenie kwasu sulfosalicylowego. Do kilku mililitrów moczu dodać 2-4 krople 20% roztworu kwasu sulfosalicylowego. Gdy reakcja dodatnia wydaje się mętna. Wynik oznaczono terminami: opalescencja, słabo dodatnia, pozytywna lub silnie pozytywna reakcja. Test z kwasem sulfosalicylowym jest jedną z najbardziej czułych próbek do oznaczania białka w moczu. Odkrywa nawet najmniejszy nieprawidłowy wzrost białka w moczu. Dzięki prostej technice ten test znalazł szerokie zastosowanie.

Test z aseptolem. Aseptol jest substytutem kwasu sulfosalicylowego. Można go przygotować z materiałów dostępnych w dowolnym laboratorium (fenol i kwas siarkowy). Jako odczynnik stosuje się 20% roztwór aseptolu. Test przeprowadza się w następujący sposób: w probówce zawierającej 2-3 ml moczu dodać 0,5-1-1 ml roztworu aseptolu do dna. Jeśli biały pierścień skoagulowanego białka pojawia się na granicy dwóch cieczy, próbka jest dodatnia.

Test Gellera. Pod kilkoma mililitrami moczu wysolono 1-2 ml 30% kwasu azotowego (ciężar właściwy 1,20). Jeśli na granicy obu cieczy powstaje biały pierścień, próbka jest dodatnia. Reakcja staje się dodatnia, jeśli białko jest większe niż 3,3 mg%. Czasami uzyskuje się biały pierścień, gdy obecne są duże ilości moczanów. W przeciwieństwie do pierścienia białkowego, pierścień moczowy nie pojawia się na granicy między dwoma płynami, ale nieco wyżej. Larionova proponuje stosowanie zamiast 30% kwasu azotowego jako odczynnika 1% roztworu kwasu azotowego w nasyconym roztworze chlorku sodu; Zapewnia to duże oszczędności w kwasie azotowym.

Próbka z zhelezystosinerodisty potasu i kwasu octowego. Ta reakcja umożliwia wyizolowanie białek surowicy z nukleoalbumin.

Równe ilości moczu wlewa się do dwóch probówek. W jednym z nich dodać kilka kropli 30% roztworu kwasu octowego. Jeśli uzyskuje się zmętnienie w porównaniu z probówką kontrolną, mocz zawiera nukleoalbuminę. Jeśli nie pojawia się zmętnienie, zawartość obu probówek jest mieszana i ponownie dzielona na dwie części. W jednej z dwóch probówek dodaj kilka kropli (nadmiar może zamienić próbkę dodatnią w próbkę ujemną) 10% roztworu soli żółtej krwi (syropu żelazocyjanku potasu). W obecności białek serwatki uzyskuje się zmętnienie.

W przypadku stężonego moczu zawierającego duże ilości kwasu moczowego i moczanu, próbkę z żelazem i syropem potasowym i kwasem octowym należy wykonać po wstępnym rozcieńczeniu (2-3 razy) moczu wodą. W przeciwnym razie może wystąpić zmętnienie spowodowane przez wytrącony kwas moczowy.

Jest to szczególnie ważne w badaniu moczu u niemowląt, które zawierają dużo kwasu moczowego i moczanów.

Spośród pozostałych próbek jakościowych dla białka w moczu, opartych na strąceniu białka, znaleźli zastosowanie: test wrzenia, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Klaudiusz, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia itp.

W produkcji wysokiej jakości próbek białka w moczu, w oparciu o odkładanie się białek, konieczne jest przestrzeganie następujących zasad ogólnych, których naruszenie prowadzi do znaczących błędów w badaniu.

1. Testowany mocz musi być kwaśny. W reakcji alkalicznej mocz jest lekko zakwaszany kwasem octowym. Wytwarzanie próbki z alkalicznym moczem, w przypadku gdy kwas jest stosowany jako odczynnik, może prowadzić do neutralizacji kwasu i do wyniku ujemnego z pozytywną reakcją. Jest to szczególnie prawdziwe w przypadku testu z kwasem sulfosalicylowym, ponieważ kwas dodaje się w bardzo małych ilościach i można go łatwo zneutralizować.

2. Badany mocz powinien być przezroczysty.

3. Próbki do ustalenia zawartości białka w moczu należy zawsze wykonywać w dwóch probówkach, z których jedna służy jako kontrola. Bez rurki kontrolnej nie można zauważyć zmętnienia światła podczas reakcji.

4. Ilość dodanego kwasu w próbkach nie powinna być zbyt duża. Duża ilość kwasu może prowadzić do tworzenia rozpuszczalnej kwaśnej albuminy i przekształcenia dodatniej próbki w negatywną.

Ze względu na ich prostą technikę, kolorymetryczne suche próbki zasługują na dużą uwagę. Po zastosowaniu tych próbek wpływ białka na kolor wskaźnika w roztworze buforowym (tak zwane wskaźniki błędu białka). Bibuła filtracyjna z dodatkiem buforu kwasu cytrynowego i błękitu bromofenolowego jako wskaźnika jest absorbowana w moczu na krótki czas. Próbka jest dodatnia, jeśli zmienia kolor na niebiesko-zielony. Porównując intensywność zabarwienia ze standardowymi papierami kolorowymi, można wyciągnąć w przybliżeniu i ilościowo wnioski. Papier wskaźnikowy jest sprzedawany w opakowaniach o odpowiednich standardach kolorystycznych, takich jak uniwersalny papier wskaźnikowy.

Metody ilościowego oznaczania białka w moczu
Zaproponowano wiele metod ilościowego oznaczania białka w moczu. Dokładne metody ilościowe do oznaczania białek w materiale biologicznym nie są szeroko stosowane do oznaczania białka w moczu ze względu na złożone i czasochłonne techniki. Metody wolumetryczne są szeroko rozpowszechnione, zwłaszcza metoda Esbacha. Są bardzo proste, ale niestety nie są bardzo dokładne. Metody grupy Brandberg-Stolnikov, które dają dokładniejsze wyniki niż metody wolumetryczne, przy stosunkowo prostej technice, są również wygodne dla kliniki. W obecności fotometru lub nefelometru wygodne są również metody nefelometryczne.

Metoda Esbacha. Zaproponował go paryski lekarz Esbach w 1874 roku. Specjalną rurkę (albuminometr Esbacha) wylewa się z moczem i odczynnikiem. Rurka jest zamknięta gumowym korkiem, dokładnie wymieszana (bez bicia!) I pozostawiona w pozycji pionowej do następnego dnia. Zgłoś podział, który dociera do kolumny osadu białkowego. Liczba znaleziona pokazuje zawartość białka. W metodzie Esbacha bardzo ważne jest, aby mocz był kwaśny. Mocz alkaliczny może neutralizować kwaśne składniki odczynnika i zapobiegać wytrącaniu się białek.

Zalety metody: jest prosta i wygodna w praktyce.

Wady: metoda jest niedokładna, wynik uzyskuje się po 24 - 48 godzinach.

Metoda Brandberga-Stolnikowa. Opiera się na teście jakości Gellera. Próbka Gellera może być użyta do oznaczenia ilościowego, ponieważ daje wynik dodatni przy zawartości białka powyżej 3,3 mg%. Jest to ostateczne stężenie białka, poniżej którego próbka staje się ujemna.

Modyfikacja Ehrlicha i Althausena. Radzieccy naukowcy S. L. Ehrlich i A. Ya. Altgauzen zmodyfikowali metodę Brandberga-Stolnikowa, wskazując na możliwości uproszczenia badań i zaoszczędzenia czasu w ich produkcji.

Pierwsze uproszczenie wiąże się z czasem pojawienia się pierścienia. Określa się dokładnie czas jego pojawienia się, bez konieczności trzymania się drugiej i trzeciej minuty.

Drugie uproszczenie pozwala ustalić, jaki rodzaj hodowli powinien zostać wykonany. Autorzy udowodnili, że wymagane rozcieńczenie można w przybliżeniu ustalić na podstawie rodzaju otrzymanego pierścienia. Rozróżniają nitkowate, szerokie
i kompaktowy pierścień.

Spośród metod nefelometrycznych zasługuje na uwagę metoda Kingsberry i Clark. 2,5 ml przefiltrowanego moczu wlewa się do małego cylindra miarowego, uzupełnionego 3% wodnym roztworem kwasu sulfosalicylowego do 10 ml. Dokładnie wymieszaj i po 5 minutach fotometrycznie w kuwecie o długości 1 cm z żółtym filtrem, używając wody jako płynu kompensacyjnego. Za pomocą fotometru Pulfricha znaleziona ekstynkcja pomnożona przez 2,5 daje ilość białka w% o. W przypadku, gdy wskaźnik ekstynkcji jest wyższy niż 1,0, mocz jest wstępnie rozcieńczony 2 razy, 4 razy lub nawet więcej.

Aby mieć jasny obraz ilości białek wydalanych z moczem, konieczne jest określenie nie tylko ich stężenia w oddzielnej porcji moczu, ale także ich całkowitej dziennej ilości. W tym celu należy zebrać mocz pacjenta przez 24 godziny, zmierzyć jego objętość w mililitrach i określić stężenie białka w porcji moczu dziennego w g%. Ilość białek wydalanych z moczem w ciągu 24 godzin określa się w zależności od dziennej ilości moczu w gramach.

Znaczenie kliniczne białka w moczu

Ludzki mocz zwykle zawiera minimalne ilości białka, których nie można ustalić za pomocą zwykłych jakościowych próbek do badania białka w moczu. Wydalanie dużych ilości białka, w którym zwykłe wysokiej jakości próbki białka w moczu stają się dodatnie - nienormalne zjawisko, zwane proteinurią. Białkomocz jest fizjologiczny tylko u noworodków, w ciągu pierwszych 4-10 dni po urodzeniu. Nazwa albuminuria, powszechnie stosowana, jest błędna, ponieważ nie tylko albumina, ale także inne rodzaje białek (globuliny itp.) Są wydalane z moczem.

Białkomocz jako objaw diagnostyczny został odkryty w 1770 r. Przez Cotuno.

Najważniejsze czynnościowe białkomocz nerkowy u dzieci jest następujące:

1. Białkomocz fizjologiczny noworodka. Występuje u większości noworodków i nie ma negatywnego znaczenia. Tłumaczy się to niedojrzałym filtrem nerkowym, uszkodzeniem porodu lub utratą płynów w pierwszych dniach życia. Białkomocz fizjologiczny zanika 4-10 dnia po urodzeniu (u wcześniaków później). Ilość białka jest mała. To nukleoalbuminę.

Długotrwała albuminuria noworodków może być objawem wrodzonych wad.

2. Udar albuminuria. Są one spowodowane przekroczeniem progu normalnej drażliwości filtra nerkowego przez znaczne podrażnienia mechaniczne, termiczne, chemiczne, umysłowe i inne - utrata płynu u niemowląt (białkomocz odwodnienia), kąpiele na zimno, obfite pokarmy bogate w białko (białkomocz pokarmowy), omacywanie nerek (albuminuria palpacyjna), przepracowany fizycznie, strach itp.

Udar albuminuria pojawia się łatwiej u dzieci we wczesnym wieku niż u dzieci w starszym wieku iu dorosłych, ponieważ nerki niemowlęcia i małego dziecka są łatwiej podrażnione. Odwodnienie albuminurii (zaburzenia odżywiania, hydrolizę, toksykozę, biegunkę, wymioty) jest szczególnie powszechne u niemowląt.

Albuminuria udarowa jest łagodna. Znikają natychmiast po wyeliminowaniu ich przyczyn. Czasami w osadach występują czasami leukocyty, cylindry i krwinki czerwone. Białko jest najczęściej nukleoalbuminą.

3. Białkomocz ortostatyczny. Ten stan jest charakterystyczny dla dzieci w wieku przedszkolnym i szkolnym. Występuje na podstawie zaburzeń naczynioruchowych w dopływie krwi do nerek. Typowe dla albuminurii ortostatycznej (stąd jej nazwa) jest to, że pojawia się tylko wtedy, gdy dziecko stoi, gdy kręgosłup jest w pozycji lordotycznej. W pozycji leżącej znika. Nukleoalbuminę uwalnia się. W wątpliwych przypadkach można skorzystać z doświadczenia ortostatycznego, które polega na tym, że: wieczorem, godzinę przed położeniem się, dziecko opróżnia pęcherz; rano, wstając z łóżka, znowu uwalnia mocz. Ten mocz nie zawiera białka. Następnie dziecko kładzie się na kolana na 15-30 minut z kijem za plecami, między łokciami obu rąk zgiętych. Tworzy pozycję lordozy, która prowadzi do uwalniania białka, bez zmian w osadzie.

W przypadku albuminurii ortostatycznej można uwolnić 8–10 g białka dziennie.

Organiczny białkomocz nerkowy ma duże znaczenie kliniczne między wszystkimi białkomoczami. Są one spowodowane organicznymi chorobami nerek (zapalenie nerek, nerczyca, stwardnienie nerek). Białkomocz jest jednym z najważniejszych i najbardziej znanych objawów organicznej choroby nerek.

1. W ostrym i przewlekłym zapaleniu kłębuszków nerkowych białkomocz występuje regularnie. Ilość białka jest umiarkowana i nie ma podobieństwa między stopniem białkomoczu a nasileniem choroby. W przeciwieństwie do tego, przewlekły i cięższy jade często występuje z mniejszymi ilościami białka niż ostre. Po ostrym zapaleniu nerek, czasem przez długi czas (lata), ustala się małe ilości białka w moczu, nie mające znaczenia patologicznego („albuminuria resztkowa”). Nie należy zapominać, że może również wystąpić „zapalenie nerek bez białkomoczu”. Czasami białko znajduje się w jednej porcji moczu, aw innym nie. Stosunek albuminy do globulin w ostrym zapaleniu nerek jest niski, aw przewlekłym zapaleniu nerek jest wyższy.

2. W przypadku stwardnienia nefroskopii ilość białek w moczu jest nieznaczna, często stwierdza się postacie choroby bez białka w moczu.

3. Ze wszystkich chorób nerek, nerczyca występuje z najbardziej wyraźnym białkomoczem.

4. W przypadku chorób zakaźnych i toksycznych, występuje tak zwany gorączkowy i toksyczny białkomocz. Są to ostre nerki, w których ilość białka jest mała. Grupa ta obejmuje również białkomocz w stanach drgawkowych (drgawki), nadczynność tarczycy, żółtaczkę, inwazje, zapalenie jelit, oparzenia, ciężką niedokrwistość itp. Te albuminurie są łagodne i szybko przechodzą (przejściowa albuminuria).

5. Gdy krew zatrzymuje się w nerkach, występuje tzw. Albuminuria zastoinowa, co jest charakterystyczne dla pacjentów z chorobami układu krążenia w fazie dekompensacji. Występuje również w wodobrzuszu i guzach brzucha.

W albuminurii gorączkowej, toksycznej i zastoinowej zwiększona przepuszczalność filtra nerkowego jest szczególnie wyraźna. Według niektórych autorów wiele z tych białkomoczów występuje bez organicznego uszkodzenia miąższu nerki.

Nadnercza albuminuria jest zwykle powodowana przez zanieczyszczenia białkowe (wydzieliny, rozbite komórki), które są wydzielane przez chore drogi moczowe i narządy płciowe. Często stwierdzano nadmierną albuminurię spowodowaną cystopielitis (pirurią), rzadziej z powodu zapalenia sromu i pochwy, kamienia i guzów układu moczowego.

Gdy dodatkowa albuminuria w osadzie znajduje dużą liczbę leukocytów i bakterii. Elementy nerkowe prawie nigdy nie występują. Ilość białka jest mała. Przefiltrowany lub odwirowany mocz zwykle nie daje dodatniej próbki białka.

U osób po przebytym zapaleniu miedniczki albuminuria zanika po bakteriurii i pirurii.

Należy podkreślić jako charakterystyczne zjawisko, że we wczesnym dzieciństwie organiczne choroby nerek są niezwykle rzadkie, dlatego też białkomocz organiczny jest również rzadki. Spośród nich znajdują się głównie gorączkowe i toksyczne. W przeciwieństwie do białkomoczu organicznego albuminuria udarowa występuje bardzo często u małych dzieci.

U starszych dzieci białkomocz organiczny jest częściej funkcjonalny. Ogólnie rzecz biorąc, z wiekiem funkcjonalny białkomocz jest mniej powszechny i ​​organiczny częściej.

Badania elektroforetyczne białek w moczu

Wielu autorów stosuje metodę elektroforetyczną do badania białek w moczu (uroproteiny). Z otrzymanego elektroforegramu jasno wynika, że ​​mają one taki sam skład jakościowy jak białka osocza. Oznacza to, że białka w moczu pochodzą z białek osocza.

Jakościowe i ilościowe oznaczanie białka w moczu.

Normalne wartości: normalne białko w moczu jest zawarte w minimalnych ilościach, które nie są wykrywane przez zwykłe reakcje jakościowe. Górna granica normy dla białka w moczu wynosi 0,033 g / l. Jeśli zawartość białka jest wyższa niż ta wartość, wówczas próbki białka wysokiej jakości stają się dodatnie.

Znaczenie kliniczne definicji:

Pojawienie się białka w moczu nazywa się białkomoczem. Białkomocz może być fałszywy i nerkowy. Nadnercza proteinuria może występować w obecności zanieczyszczeń pochodzenia białkowego z narządów płciowych (zapalenie pochwy, zapalenie cewki moczowej, itp.), Podczas gdy ilość białka jest nieznaczna - do 0,01 g / l. Białkomocz nerkowy może być funkcjonalny (z hipotermią, wysiłkiem fizycznym, gorączką) i organiczny - z kłębuszkowym zapaleniem nerek, odmiedniczkowym zapaleniem nerek, zapaleniem nerek, nerczycą, niewydolnością nerek. W białkomoczu nerkowym zawartość białka może wynosić od 0,033 do 10-15 g / l, czasami wyższa.

Zasada metody polega na tym, że białko pod wpływem kwasów nieorganicznych koaguluje (staje się widoczne). Stopień zmętnienia zależy od ilości białka.

Wykrywanie białka w moczu za pomocą 20% kwasu sulfosalicylowego.

Odczynniki: 20% roztwór kwasu sulfosalicylowego. Wyposażenie: ciemne tło.

1. Wymagania dotyczące moczu: mocz musi być kwaśny (lub lekko kwaśny) pH, musi być przezroczysty, w tym celu mocz jest odwirowywany. Mocz alkaliczny zakwasza się do słabo kwaśnego medium reakcyjnego, stosując papier kontrolny do kontroli.

2. W 2 probówkach o tej samej średnicy wlać 2 ml przygotowanego moczu. 1 probówka - kontrola, 2 - doświadczenie. Do probówki dodaj 4 krople 20% kwasu sulfosalicylowego.

3. Wynik jest zaznaczony na ciemnym tle.

4. W obecności białka mocz w probówce rośnie mętny.

Wysokiej jakości oznaczanie białka w moczu za pomocą pasków testowych.

Do identyfikacji białkomoczu stosuje się różne monotesty: Albufan, Albustiks, Biofan E i testy polityczne: Triscan, Nonafan i inne.

Wykrywanie białka w moczu metodą Robertsa - Stolnikowa.

Zasada metody polega na tym, że białko pod wpływem kwasów nieorganicznych koaguluje (staje się widoczne). Stopień zmętnienia zależy od ilości białka (tj. Testu pierścieniowego Gellera). Gdy stężenie białka w moczu wynosi 0,033 g / l, pod koniec 3 minut po nałożeniu warstwy moczu pojawia się cienka biała nić.

Odczynniki: 50% roztwór kwasu azotowego lub odczynnik Robertsa (98 części nasyconego roztworu chlorku sodu i 2 części stężonego kwasu chlorowodorowego) lub reagent Larionic (98 części nasyconego roztworu chlorku sodu i 2 części stężonego kwasu azotowego).

Wyposażenie: ciemne tło.

1. Wymagania dotyczące moczu: mocz musi być kwaśny (lub lekko kwaśny) pH, musi być przezroczysty, w tym celu mocz jest odwirowywany. Mocz alkaliczny zakwasza się do słabo kwaśnego medium reakcyjnego, stosując papier kontrolny do kontroli.

2. Wlać 2 ml 50% roztworu kwasu azotowego lub jednego z odczynników do probówki, a następnie ostrożnie wlać pipetą taką samą objętość przygotowanego moczu wzdłuż ściany probówki.

3. Próbkę pozostawia się na 3 minuty

4. Po 3 minutach zgłoś wynik. Wynik jest zaznaczony na ciemnym tle w świetle przechodzącym. Jeśli pierścień jest szeroki, zwarty, to mocz jest rozcieńczany wodą destylowaną i ponownie nakładany na odczynnik.

5. Mocz jest rozcieńczany aż po 3 minutach powstaje cienki pierścień włókienkowy.

6. Obliczanie zawartości białka w moczu odbywa się według wzoru:

C = 0,033 g / l x stopień rozcieńczenia.

194.48.155.245 © studopedia.ru nie jest autorem opublikowanych materiałów. Ale zapewnia możliwość swobodnego korzystania. Czy istnieje naruszenie praw autorskich? Napisz do nas | Opinie.

Wyłącz adBlock!
i odśwież stronę (F5)
bardzo konieczne

Metodyczny rozwój zajęć praktycznych „Oznaczanie białka w moczu” (1 kurs)

Capital Training Center
Moskwa

Temat: Oznaczanie białka w moczu.

Cel: Zbadanie badania właściwości chemicznych moczu.

Aby zbadać ilościowe i jakościowe metody oznaczania białka w moczu;

Poznaj podstawowe zasady pracy z paskami testowymi na automatycznych analizatorach.

Rodzaj zatrudnienia: praktyczne (6 godzin)

Student powinien wiedzieć:

Jakościowe próbki do oznaczania białka.

Roberts - metoda Stolnikowa.

Oznaczanie białka 3% SSC.

Biuret metoda oznaczania białka (THU).

Wartość diagnostyczna wskaźników badawczych.

Student powinien umieć:

Przygotuj miejsce pracy do badania moczu.

Przygotuj odczynniki, naczynia i sprzęt do badania.

Określenie właściwości chemicznych moczu (białko w moczu metodami jakościowymi i ilościowymi).

Praca z pustymi produktami (projektowanie formularzy analitycznych).

Prawidłowo interpretuj wyniki badania.

Oznacza osiągnięcie celu:

1. Praca z notatkami, literaturą edukacyjną i specjalną.

2. Przygotowanie do ćwiczeń praktycznych z wykorzystaniem zaleceń metodycznych nauczyciela, wdrożenie i wykonanie pracy praktycznej.

3. Praca z informacyjnymi środkami edukacyjnymi w mediach elektronicznych i papierowych.

Sprzęt do gabinetów i biurowych stanowisk pracy:

miejsca według liczby studentów;

miejsce pracy nauczyciela;

specjalistyczne meble i sprzęt.

Techniczne narzędzia szkoleniowe:

komputery do wyposażenia miejsca pracy nauczyciela i uczniów;

urządzenia techniczne do audiowizualnego wyświetlania informacji;

audiowizualne pomoce dydaktyczne (prezentacja, wideo szkoleniowe).

Efektem opanowania lekcji jest:

Kształtowanie praktycznych umiejętności zawodowych i początkowego doświadczenia praktycznego, w tym kompetencji zawodowych (PC) i ogólnych (QA):

PC 1.1. Przygotuj miejsce pracy do laboratoryjnych badań klinicznych.

PC 1.2. Przeprowadzenie laboratoryjnych badań klinicznych materiałów biologicznych.

PC 1.3. Zapisz wyniki badań.

PC 1.4. Utylizuj zużyty materiał, dezynfekuj i sterylizuj używane szkło laboratoryjne, narzędzia i sprzęt ochronny.

OK 1. Zrozumieć naturę i społeczne znaczenie ich przyszłego zawodu, wykazać stałe zainteresowanie nim.

OK 2. Organizuj własne działania, wybieraj standardowe metody i sposoby wykonywania zadań zawodowych, oceniaj ich skuteczność i jakość.

OK 6. Pracuj w zespole i zespole, skutecznie komunikuj się z kolegami, kierownictwem, pacjentami.

OK 9. Być kierowanym w warunkach zmiany technologii w działalności zawodowej.

OK 13. Zorganizować miejsce pracy zgodnie z wymogami ochrony pracy, higieny przemysłowej, bezpieczeństwa zakaźnego i pożarowego.

I moduł. Część teoretyczna z elementami samodzielnej pracy

Zadanie numer 1. Badanie i zarys materiałów do nauki w skoroszytach.

Zdrowa osoba zwykle zawiera mniej niż 0,002 g / l, a rzadko do 0,012 g / l białka, i zazwyczaj ta zawartość białka w moczu jest nazywana „w postaci śladowych” i nie jest wykrywana konwencjonalnymi metodami chemicznymi w zdrowym ludzkim moczu.

Zawartość białka w porcjach moczu zebranych w różnych porach dnia może się znacznie różnić.

Białko w moczu nazywa się białkomoczem.

W zależności od dziennej utraty białka rozróżnia się następujące stopnie białkomoczu: umiarkowany - do 1 g; medium - od 1 do 3 g; wymawiane - ponad 3 g.

Istnieją dwa główne typy białkomoczu:

Białkomocz, spowodowany chorobami dróg moczowych;

białkomocz, ze zmianami (chorobami) nerek.

Białkomocz związany z procesami zapalnymi dróg moczowych, któremu towarzyszy pojawienie się w moczu znacznej liczby leukocytów lub erytrocytów, co jednak nie eliminuje jednoczesnego wnikania białka w moczu z miąższu nerki zawartość białka rzadko przekracza 1 g / l.

Białkomocz nerkowy w większości przypadków wiąże się ze zwiększoną przepuszczalnością kłębuszków nerkowych i jest podzielony na 2 grupy:

Do fizjologicznego białkomoczu należą przypadki tymczasowego pojawienia się białka w moczu, niezwiązane z chorobami:

po zjedzeniu dużej ilości pokarmu bogatego w niezdenaturowane białka (surowe mięso, surowe jaja);

z intensywną pracą mięśniową (długie wędrówki, imprezy sportowe);

gdy bierzesz zimną kąpiel lub prysznic;

z silnymi doświadczeniami emocjonalnymi;

z napadami padaczkowymi.

Rozróżnić ortostatyczny lub młodzieńczy białkomocz, występujący u dzieci i młodzieży oraz przechodzący z wiekiem. W relacji różnicowo-diagnostycznej istotne jest, że albuminuria ortostatyczna często występuje w okresie zdrowienia po ostrym zapaleniu kłębuszków nerkowych.

Patologiczne białkomocz nerkowy może być wynikiem chorób organicznych nerek i innych narządów i układów: ostrego kłębuszkowego zapalenia nerek; przewlekłe zapalenie kłębuszków nerkowych; ostre odmiedniczkowe zapalenie nerek; przewlekłe odmiedniczkowe zapalenie nerek; nefropatia kobiet w ciąży; różne choroby związane z gorączką; ciężka przewlekła niewydolność serca; i łagodna choroba nerek; nerczyca lipoidowa; gruźlica nerek; gorączki krwotoczne; krwotoczne zapalenie naczyń; ciężka niedokrwistość; nadciśnienie itp.

Zadanie numer 2. Przepisz i narysuj diagramy laboratoryjnych metod oznaczania białka w moczu.

Laboratoryjne metody oznaczania białka w moczu

Istnieją jakościowe i ilościowe metody oznaczania białka w moczu, są one oparte na koagulacji białka w objętości moczu lub na granicy pożywki (mocz i kwas); podczas pomiaru stopnia koagulacji sprawia, że ​​próbka jest ilościowa.

próbka z 20% kwasem sulfosalicylowym (standaryzowana);

Test pierścieniowy Gellera (obecnie nieużywany);

wykrywanie białka za pomocą papieru wskaźnikowego (paski) i pasków testowych.

jednolita metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov;

z 3% kwasem sulfosalicylowym.

Jakościowe metody oznaczania białka w moczu

Zadanie numer 3. Oznaczanie białka w moczu przy użyciu standaryzowanej próbki z 20% kwasem sulfosalicylowym

Zasada metody: opiera się na koagulacji białka w objętości moczu lub na granicy pożywki (mocz i kwas)

Naczynia, sprzęt i odczynniki:

20% kwas sulfosalicylowy (kwas 2-hydroksy-5-sulfobenzoesowy C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml przefiltrowanego moczu

2 sztuki probówki chemiczne

Trzy probówki przefiltrowanego moczu wprowadza się do dwóch probówek, do jednego z nich dodaje się 6-8 kropli kwasu sulfosalicylowego (doświadczane). Na ciemnym tle porównywane są obie rurki.

Interpretacja wyników:

Zmętnienie w probówce wskazuje na obecność białka w moczu - próbka jest dodatnia.

Uwaga Mocz alkaliczny zakwasza się przed badaniem przez dodanie kilku kropli 10% roztworu kwasu octowego.

Zadanie numer 4. Oznaczanie białka za pomocą testu pierścieniowego Gellera

Zasada metody: Próbka pierścieniowa opiera się na fakcie, że gdy kwas azotowy jest dodawany do moczu na granicy faz (kwas - mocz) w obecności białka, koaguluje i pojawia się biały pierścień.

Naczynia, sprzęt i odczynniki:

- odczynniki: 30% roztwór kwasu azotowego (HNO 3) (d = 1,2) lub Laryonic Reactant: 20–30 g chlorku sodu (NaCl) rozpuszczonego w 100 ml wody destylowanej po podgrzaniu, schłodzeniu, przefiltrowaniu; 1 ml stężonego HNO3 dodaje się do 99 ml przesączu.

Do probówki wlać 1-2 ml 30% roztworu HNO 3 lub odczynnika Larionova i delikatnie nanieść na ścianę taką samą ilość przefiltrowanego moczu.

Interpretacja wyników:

Pojawienie się na granicy dwóch płynów pomiędzy 2. a 3. minutą cienkiego białego pierścienia wskazuje na obecność białka w moczu.

Narysuj schemat oznaczania białka

Oznaczanie ilościowe białka

Zasada metody: Próbka pierścieniowa Gellera opiera się na fakcie, że gdy kwas azotowy jest dodawany do moczu na granicy faz (kwas - mocz) w obecności białka, koaguluje i pojawia się biały pierścień.

Naczynia, sprzęt i odczynniki:

Płyn biologiczny (mocz);

Do probówki wlać 1-2 ml 30% roztworu HNO 3 lub odczynnika Larionova i delikatnie nanieść na ścianę taką samą ilość przefiltrowanego moczu.

Interpretacja wyników:

Wygląd na granicy dwóch płynów między 2 a 3 minutą
cienki biały pierścień wskazuje na obecność białka w stężeniu około 0,033 g / l. Jeśli pierścień pojawi się wcześniej niż 2 minuty po laminowaniu, mocz należy rozcieńczyć wodą destylowaną i powtórzyć test z rozcieńczonym moczem. Stopień rozcieńczenia moczu dobiera się w zależności od rodzaju pierścienia, jego szerokości, zwartości i czasu pojawienia się.

Z nitkowatym pierścieniem, który pojawił się wcześniej 2 minuty, mocz rozcieńcza się 2 razy, szerokim - 4 razy, zwartym - 8 razy itd. Stężenie białka oblicza się przez pomnożenie rozcieńczenia przez 0,033 g / l.

Biały pierścień może powstać, gdy jest duża liczba moczanów; w przeciwieństwie do białka, pojawia się nieco powyżej granicy dwóch cieczy i rozpuszcza się, gdy jest lekko podgrzewany.

Zadanie numer 6. Określenie ilości białka w moczu z 3% kwasem sulfosalicylowym

Zasada metody: Stężenie białka w moczu jest proporcjonalne do zmętnienia, które występuje, gdy koaguluje kwas sulfosalicylowy

Naczynia, sprzęt i odczynniki:

0,9% roztwór chlorku sodu;

1% roztwór wzorcowy albuminy - 1 g liofilizowanej albuminy (z ludzkiej lub bydlęcej surowicy) rozpuszcza się w małej ilości 0,9% roztworu NaCl w kolbie o pojemności 100 ml, a następnie uzupełnia do tego samego rozpuszczalnika. Odczynnik stabilizuje się przez dodanie 1 ml 5% roztworu azydku sodu (NaN 3). Przechowywany w lodówce odczynnik jest stabilny przez 2 miesiące.

1,25 ml przefiltrowanego moczu wprowadza się do probówki, dodaje się 3,75 ml 3% roztworu kwasu sulfosalicylowego i miesza. Po 5 minutach próbkę fotometruje się na PEC przy długości fali 590–650 nm (filtr pomarańczowy lub czerwony) w stosunku do kontroli w kuwecie o długości ścieżki optycznej 5 mm. Kontrola służy jako próbka, w której 3,75 ml 0,9% roztworu chlorku sodu dodaje się do 1,25 ml moczu. Stężenie białka oblicza się zgodnie z wykresem kalibracji, którego budowę przygotowują rozcieńczenia standardowego roztworu albuminy. (patrz tabela). Z każdego otrzymanego rozcieńczonego roztworu pobiera się 1,25 ml i traktuje jako próbki doświadczalne.

Przygotowanie rozcieńczeń do kreślenia kalibracji

Roztwór standardowy, ml

0,9% roztwór chlorku sodu, ml

Stężenie białka, g / l

Zależność prostoliniowa wielkości ekstynkcji i stężenia białka utrzymuje się do 1 g / l. Przy wyższych stężeniach białka próbkę należy rozcieńczyć i wziąć pod uwagę rozcieńczenie w obliczeniach.

Jeśli w moczu znajdują się substancje zawierające jod, można uzyskać wyniki fałszywie dodatnie. Dlatego też testu nie można stosować u pacjentów przyjmujących preparaty jodu lub poddanych badaniom z użyciem związków rentgenowskich zawierających jod. Fałszywie dodatnie reakcje J podczas badania mogą być spowodowane zażywaniem leków sulfanilamidowych, dużych dawek penicyliny i wysokich stężeniach w moczu kwasu moczowego.

Narysuj schemat oznaczania białka

Numer zadania 7. Bens-Jones Detection in Urine

Zasada metody: oparta na termoprecypitacji reakcji

Naczynia, sprzęt i odczynniki:

Odczynnik: bufor octanowy 2 M pH 4,9.

4 ml przefiltrowanego moczu miesza się z 1 ml roztworu buforowego i ogrzewa przez 15 minut w łaźni wodnej w 56 ° C.

Interpretacja wyników:

W obecności białka Bens-Jonesa w moczu wyraźny osad pojawia się w pierwszych 2 minutach.

Gdy stężenie białka jest mniejsze niż 3 g / l, próbka może być ujemna, co jest dość rzadkie, ponieważ zwykle stężenie białka Bens-Jones w moczu jest bardzo znaczące.

Najbardziej niezawodnym wykrywaniem białka Bensa-Jonesa jest strącanie w temperaturze 40-60 ° C. Jednak w moczu zbyt kwaśnym (pH poniżej 3,0) lub zbyt alkalicznym (pH powyżej 6,5), przy niskiej gęstości względnej moczu i niskim stężeniu beżu Bens-Jonesa (poniżej 3 g / l), sedymentacja może nie wystąpić.

Narysuj schemat oznaczania białka

II moduł. Niezależna praca na etapie badań

Zadanie numer 1. Zbadaj i opisz zastosowanie №1 „Wykrywanie białka za pomocą pasków diagnostycznych”

- Uzyskaj próbki płynu biologicznego (moczu) od nauczyciela, ponumeruj próbki;

- Przeprowadzić badanie moczu za pomocą pasków diagnostycznych;

- Oceń wynik (norma, patologia). Załóżmy, że przyczyną białka w moczu.

- Napisz wynik w formularzach analizy, przekaż je nauczycielowi.

„Wykrywanie białka za pomocą pasków diagnostycznych”

Zasada Białko zmienia kolor wskaźnika zastosowanego na pasku. Wskaźniki są zapakowane w zestaw 100 pasków, które są przechowywane w szczelnie zamkniętym piórniku w chłodnym i suchym miejscu.

Zasady pracy z diagnostycznymi paskami testowymi

Podczas pracy z diagnostycznymi paskami testowymi należy przestrzegać następujących zasad:

- przechowywać paski testowe w szczelnie zamkniętych opakowaniach;

- przechowywać pojemniki w ciemnym, suchym i chłodnym miejscu w temperaturze nie przekraczającej 30ºС, ale nie w lodówce;

- Nie wystawiaj taśm na działanie wilgoci i bezpośredniego światła słonecznego, wysokiej temperatury i lotnych substancji chemicznych;

- uzyskać tylko niezbędną liczbę pasków, a następnie natychmiast zamknąć sprawę;

- Nie dotykaj stref diagnostycznych palcami.

Zasady testowania

1. Do badania użyj porannego moczu zebranego w jednorazowym plastikowym pojemniku na mocz (lub czystych suchych naczyniach). Wymieszaj dostarczony mocz, ale nie wiruj.

W przypadku stosowania niestandardowych, dostosowanych opakowań, pozostałości detergentu w pojemniku na mocz powodują fałszywe wyniki.

2. Z piórnika weź pasek testowy.

3. Natychmiast zamknij obudowę fabryczną pokrywą, chroń pasek przed wilgocią.

4. Opuść paski papieru wskaźnikowego na 2-3 sekundy w badanym moczu i natychmiast je usuń.

5. Aby usunąć nadmiar wilgoci ze stref diagnostycznych paska, przeprowadź go długą krawędzią wzdłuż krawędzi pojemnika (lub innego pojemnika, w którym dostarczany jest mocz) lub dołącz krawędź paska do bibuły filtracyjnej.

Nie można zmyć nadmiaru moczu ze stref diagnostycznych.

6. Po upływie czasu określonego na etykiecie pojemnika lub w instrukcjach dla każdego testu, upłynąć, porównać kolor odpowiedniej strefy diagnostycznej ze skalą kolorów na etykiecie kanistra z paskami (standard). Procedurę testową przedstawiono na rysunkach 1-7.

7. Reakcja jest oceniana jako pozytywna lub negatywna. Lub wyrażone liczbowo wg / l. (patrz rysunek nr 8).